Bilirubina in polvere CAS 635-65-4viene estratto principalmente dalla bile. La bilirubina è insolubile in acqua, solubile in solventi organici come benzene, cloroformio e disolfuro di carbonio e leggermente solubile in etanolo ed etere. La bilirubina può anche essere sciolta in una miscela calda di etanolo e cloroformio. Il sale sodico della bilirubina è facilmente solubile in acqua, ma i suoi sali di calcio, magnesio e bario sono insolubili in acqua. La bilirubina è un cristallo monoclino di colore arancione chiaro o bruno-rossastro intenso. Il suo solido secco è relativamente stabile e anche la soluzione di cloroformio è relativamente stabile al buio. È instabile in soluzione alcalina (come 0,1 mmol/L di idrossido di sodio) o quando incontra ioni di ferro trivalente e viene rapidamente ossidato a biliverdina. La bilirubina può legarsi alla glicina, all'alanina o all'istidina. L'aggiunta di proteine sieriche, vitamine o EDTA può stabilizzare la bilirubina.
1. Preparazione del sale di calcio mediante metodo di estrazione indiretta del sale di calcio: aggiungere 3-3,5 volte di surnatante di acqua di calce satura nella bile fresca di maiale sotto agitazione, quindi continuare a mescolare per 5-10min, Ph{ {4}}, rimuovere la schiuma quando riscaldato a 50 gradi con una garza, continuare a scaldare fino all'ebollizione, conservare per 2 minuti, raffreddare, filtrare e ottenere sale di calcio. Preparazione del prodotto finito di bilirubina: prendere il sale di calcio e aggiungere 0,8 volte la quantità di acqua per formare una pasta, filtrarlo attraverso 30-40 maglie, aggiungere lo 0,3% di antiossidante al filtrato, aggiungere sale e acido per regolare il pH su 1,5, lasciare riposare per 4 ore, filtrare, aggiungere 8-10 volte la quantità di etanolo all'80% al panello di filtrazione, schiacciare e mescolare bene, aggiungere antiossidante, lasciare riposare per una notte e ottenere il precipitato. Aggiungere 4-6 volte la quantità di etanolo all'80% o più e antiossidante, mescolare e lasciare in ammollo per una notte. Ripetere questo processo 3-4 volte e asciugare il precipitato a una temperatura inferiore a 70 gradi per ottenere il prodotto finito di bilirubina.
Precipitazione del sale di calcio [HCl, solfito di sodio pesante] → precipitazione [etanolo, solfito di sodio pesante] → precipitazione [70 gradi] → prodotto bilirubina.
2.Preparazione del bilirubinato di calcio mediante metodo di estrazione con cloroformio: la bile fresca di maiale viene regolata a pH 12 con idrossido di sodio, riscaldata all'ebollizione, viene aggiunta una soluzione di cloruro di calcio, quindi riscaldata all'ebollizione, raffreddata, filtrata per ottenere il bilirubinato di calcio. Bile di maiale [NaOH, CaCl2] → [pH 12, 100 gradi] Preparazione della polvere di bilirubina CAS 635-65-4 sale di calcio prodotto finito di bilirubina: il sale di calcio di bilirubina viene regolato a pH 1-2 con acido cloridrico 1:1, si scarica l'acqua acida, si estrae il cloroformio con cloroformio, si lava con etanolo anidro e si lascia la soluzione a circa 5 gradi per ottenere bilirubina prodotto finito.
Sale di calcio della bilirubina [HCl] → [pH1-2] composto acido [cloroformio, etanolo anidro] → prodotto finito della bilirubina [5 gradi]
3. Metodo migliorato del sale di calcio per l'acidificazione del sale di calcio: prendere la bile fresca di maiale e aggiungere l'1% di idrossido di calcio, mescolare bene, riscaldare rapidamente a 90-97 gradi, tenere in caldo per 10 minuti e filtrare per ottenere sale di calcio. Il riscaldamento a 40 gradi causerà la comparsa di grasso, che può essere rimosso delicatamente. Il sale di calcio ottenuto può essere lavato una volta con acqua calda per rimuovere gli alcali in eccesso e altre impurità. Prendi il sale di calcio e aggiungi più di 10 volte la quantità di acqua per disperderlo uniformemente. Aggiungere l'1% di antiossidante e mescolare (60 giri/min) per aggiungere goccia a goccia acido cloridrico 1:2. Entro 40 minuti raggiungere il pH 2,0 ed attendere che il pH rimanga invariato per ottenere una sostanza acida. Bile di maiale [1% idrossido di calcio] → [90-97 gradi, 15 min] Sale biliare di calcio [antiossidante, acido cloridrico] → [pH2,40 min] Lavaggio con acido acido alcolico, lavaggio con acqua: la bilirubina acidificata viene dispersa uniformemente a temperatura ambiente con una quantità di etanolo 10 volte superiore, il pH non deve essere superiore a 5, si aggiunge lo 0,5% di antiossidante, si agita e si lascia per circa 1 ora per la stratificazione. Vai allo strato superiore della soluzione alcolica e raccogli la bilirubina precipitata. Lavare la bilirubina con acqua calda a 50 gradi per circa 5 minuti, raccogliere la bilirubina galleggiante, aggiungere rapidamente etanolo per la disidratazione e rimuovere l'etanolo per ottenere bilirubina grezza. Composto acido [etanolo] → [1h] bilirubina precipitata [acqua calda a 50 gradi] → [etanolo] estrazione, evaporazione, cristallizzazione ed essiccazione della bilirubina grezza: prendere la bilirubina grezza e aggiungere 10 volte cloroformio per agitare a 50 gradi per 10 minuti. Se necessario, estrarre 2-3 volte e il residuo dovrebbe essere bianco. L'estratto cloroformio è stato sottoposto a distillazione sotto vuoto finché non è quasi asciutto, con conseguente formazione della maggior parte dei cristalli di bilirubina. Dopo il raffreddamento a temperatura ambiente, è stato aggiunto etanolo e ulteriormente raffreddato a 4 gradi per 10 minuti. I cristalli di bilirubina sono stati filtrati e trattati con etanolo anidro o etere, seguiti da essiccazione sotto vuoto per ottenere bilirubina di alta qualità.
Bilirubina grezza [cloroformio] → [10 minuti] soluzione di cloroformio [cristallizzazione] → bilirubina di alta qualità
4.Preparazione della soluzione di idrolisi mediante metodo di estrazione con resina a scambio ionico: prendere la bile di mucca fresca, filtrarla con una garza, aggiungere 2mol/L di soluzione di idrossido di sodio per regolare il pH a 10 mescolando, far bollire e filtrare per ottenere l'idrolizzato.
Adsorbimento ed eluizione dell'acido biliare mediante colonna di resina con soluzione di idrolisi: versare la soluzione di idrolisi bollita nella colonna di resina preriscaldata fino a quando il colore dell'effluente diventa più scuro e l'adsorbimento è saturo.
Aggiungere acqua fredda finché la temperatura all'interno della colonna non scende a temperatura ambiente, quindi aggiungere una soluzione diluita di bisolfito cloridrato dalla parte superiore della colonna per portare il pH dell'effluente a 1.
Lavare con etanolo al 75%, raccogliere quando l'eluente è una soluzione torbida di colore verde scuro e lavare fino a quando l'effluente diventa limpido e il pH è quasi neutro. Lavare nuovamente con etanolo al 95%.
Raccogliere la soluzione di eluizione di etanolo per la preparazione dell'acido biliare. Soluzione di idrolisi [colonna a scambio ionico] → [75% etanolo, 95% etanolo] Eluente di etanolo per l'eluizione, la concentrazione e l'essiccazione della bilirubina: rilasciare tutto l'etanolo al 95% dalla colonna, immergerlo in cloroformio per 10 minuti e raccogliere l'eluente di cloroformio finché non si appare il colore giallo.
Distillare l'eluente di cloroformio quasi a secchezza, aggiungere etanolo anidro e continuare a recuperare fino all'eliminazione del cloroformio. Filtrare a caldo, raccogliere la bilirubina, asciugare e ottenere il prodotto finito di bilirubina.
Iolanda
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